Оборудование

ФЭК;

пробирки 7-10 мл;

штатив для пробирок;

колба 500 мл;

пипетки 0,1 и 5 мл.

Реактивы

Реактив 1 - смесь одной части ледяной уксусной кислоты, пяти частей уксусного ангидрида и одной части концентрированной серной кислоты, которая должна выдерживать пробу Саваля .

Реактивы смешиваются в вышеуказанной последовательности при постоянном охлаждении колбы, в которой готовится смесь. Полученная смесь должна быть бесцветной или слегка желтоватой. При несоблюдении последовательности добавления реактивов и без охлаждения смесь получается темно-желтой и непригодной к употреблению. Смесь переливается в склянку темного стекла с притертой пробкой и хранится в холодильнике при температуре 4^о С до двух недель.

Стандартный раствор холестерина. Растворяют 10 мг холестерина в 10 мл хлороформа (1 мл раствора содержит 1 мг (1000 γ холестерина).

Ход определения

В химические чистые пробирки наливают пипеткой 2,1 мл смеси (раствор 1), добавляют 0,1 мл негемолизированной сыворотки крови. Сыворотка добавляется медленно, так, чтобы она стекала по стенке пробирки. Пробирку быстро и энергично встряхивают 10-12 раз и помещают в термостат при 37°С на 20 минут. Затем колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром 3Х8 в кювете 0,5 см. После колориметрирования делают расчет по предварительно построенному графику.

Калибровочная кривая

Из стандартного раствора холестерина готовят ряд разведений. В полученные стандартные пробы также добавляют 2,1 мл реактива 1,энергично встряхивают и помещают в термостат, после чего колориметрируют .

Калибровочную кривую строят по цифрам экстинций , полученных в результате колориметрирования стандартных растворов