Пятница, 10.07.2020, 21:49
 Физиология и биохимия гидробионтов
Главная Регистрация Вход
Приветствую Вас, Гость · RSS
Меню сайта
Категории каталога
Физиология [9]
Биохимия [9]
Литература [0]
Генетика [1]
Ихтиология [0]
 Каталог статей
Главная » Статьи » Методики » Биохимия

Определение холестерина по методу Илька

Принцип реакции: холестерин в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной и серной кислот дает зеленое окрашивание.

Оборудование

 

ФЭК;

пробирки 7-10 мл;

штатив для пробирок;

колба 500 мл;

пипетки 0,1 и 5 мл.

Реактивы

 

Реактив 1 - смесь одной части ледяной уксусной кислоты, пяти частей уксусного ангидрида и одной части концентрированной серной кислоты, которая должна выдерживать пробу Саваля .

Реактивы смешиваются в вышеуказанной последовательности при постоянном охлаждении колбы, в которой готовится смесь. Полученная смесь должна быть бесцветной или слегка желтоватой. При несоблюдении последовательности добавления реактивов и без охлаждения смесь получается темно-желтой и непригодной к употреблению. Смесь переливается в склянку темного стекла с притертой пробкой и хранится в холодильнике при температуре 4о С до двух недель.

Стандартный раствор холестерина. Растворяют 10 мг холестерина в 10 мл хлороформа (1 мл раствора содержит 1 мг (1000 γ холестерина).

Ход определения

 

В химические чистые пробирки наливают пипеткой 2,1 мл смеси (раствор 1), добавляют 0,1 мл негемолизированной сыворотки крови. Сыворотка добавляется медленно, так, чтобы она стекала по стенке пробирки. Пробирку быстро и энергично встряхивают 10-12 раз и помещают в термостат при 37°С на 20 минут. Затем колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром 3Х8 в кювете 0,5 см. После колориметрирования делают расчет по предварительно построенному графику.

Калибровочная кривая

 

Из стандартного раствора холестерина готовят ряд разведений. В полученные стандартные пробы также добавляют 2,1 мл реактива 1,энергично встряхивают и помещают в термостат, после чего колориметрируют .

Калибровочную кривую строят по цифрам экстинций , полученных в результате колориметрирования стандартных растворов

Категория: Биохимия | Добавил: bugayov (12.05.2008) | Автор: Леонид Бугаев
Просмотров: 3903 | Рейтинг: 0.0/0 |
Форма входа
Поиск
Друзья сайта
GISMETEO: Погода по г. Ростов-на-Дону

Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0