Понедельник, 13.07.2020, 03:52
 Физиология и биохимия гидробионтов
Главная Регистрация Вход
Приветствую Вас, Гость · RSS
Меню сайта
Категории каталога
Физиология [9]
Биохимия [9]
Литература [0]
Генетика [1]
Ихтиология [0]
 Каталог статей
Главная » Статьи » Методики » Биохимия

Определение активности супероксиддисмутазы (СОД)

Оборудование:

 

Спектрофотометр СФ-46.

Центрифуга.

Пробирки стеклянные.

Пробирки центрифужные .

Мерные цилиндры 50 -100 мл.

Реактивы:

 

Фосфатный буфер рН 7,8.

ЭДТА 0,05 М.

Фосфорнокислый калий однозамещенный.

Этиловый спирт.

Хлороформ.

Фенилметасульфат .

Тетразолий -N - синий.

НАД · Н.

Ход анализа

 

Активность СОД регистрируется по интенсивности ингибирования источником фермента восстановления тетразолия -N - синего.

Навеску ткани 40 мг гомогенизируют в 2 мл фосфатного буфера (рН 7,8) с 0,05 М ЭДТА. Лизат получают, добавляя к 1 мл гомогената 300 мл КН2РО4 и 0,5 мл смеси хлороформ : этанол (3 : 5). Обработку гомогената проводят в ледяной бане с последующим центрифугированием при 6000 об/мин в течение 15 минут. Работают с супернатантом . Реакционная смесь содержит 0,3-0,2 мл лизата , 3 · 10 - 3 М мкМ фенилметасульфата , 1,25 · 10 - 5 тетразозия - N - синего.

В опытных и контрольных пробах реакцию запускали 0,1 - 0,15. мл 0,1 мМ НАД · Н. Инкубацию вели 10 мин при 20 - 22о С.

Оптическую плотность регистрируют при 540 нм против смеси, содержащей все компоненты, кроме НАД · Н. За единицу активности СОД принимали такое количество фермента, которое, будучи добавленно к смеси, уменьшает скорость неингибированной реакции на 50%, и выражается в удельных единицах активности мг - 1 белка.

Категория: Биохимия | Добавил: bugayov (12.05.2008)
Просмотров: 4357 | Рейтинг: 5.0/1 |
Форма входа
Поиск
Друзья сайта
GISMETEO: Погода по г. Ростов-на-Дону

Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0