Оборудование:

Спектрофотометр СФ-46.

Центрифуга.

Пробирки стеклянные.

Пробирки центрифужные .

Мерные цилиндры 50 -100 мл.

Реактивы:

Фосфатный буфер рН 7,8.

ЭДТА 0,05 М.

Фосфорнокислый калий однозамещенный.

Этиловый спирт.

Хлороформ.

Фенилметасульфат .

Тетразолий -N - синий.

НАД · Н.

Ход анализа

Активность СОД регистрируется по интенсивности ингибирования источником фермента восстановления тетразолия -N - синего.

Навеску ткани 40 мг гомогенизируют в 2 мл фосфатного буфера (рН 7,8) с 0,05 М ЭДТА. Лизат получают, добавляя к 1 мл гомогената 300 мл КН₂РО₄ и 0,5 мл смеси хлороформ : этанол (3 : 5). Обработку гомогената проводят в ледяной бане с последующим центрифугированием при 6000 об/мин в течение 15 минут. Работают с супернатантом . Реакционная смесь содержит 0,3-0,2 мл лизата , 3 · 10 - 3 М мкМ фенилметасульфата , 1,25 · 10 - 5 тетразозия - N - синего.

В опытных и контрольных пробах реакцию запускали 0,1 - 0,15. мл 0,1 мМ НАД · Н. Инкубацию вели 10 мин при 20 - 22^о С.

Оптическую плотность регистрируют при 540 нм против смеси, содержащей все компоненты, кроме НАД · Н. За единицу активности СОД принимали такое количество фермента, которое, будучи добавленно к смеси, уменьшает скорость неингибированной реакции на 50%, и выражается в удельных единицах активности мг - 1 белка.