Понедельник, 13.07.2020, 05:41
 Физиология и биохимия гидробионтов
Главная Регистрация Вход
Приветствую Вас, Гость · RSS
Меню сайта
Категории каталога
Физиология [9]
Биохимия [9]
Литература [0]
Генетика [1]
Ихтиология [0]
 Каталог статей
Главная » Статьи » Методики » Биохимия

Определение активности катепсина Д (Дингл , 1977).

Оборудование

 

Спектрофотометр СФ-46.

Центрифуга.

Пробирки стеклянные.

Пробирки центрифужные .

Мерные цилиндры 50 -100 мл.

Реактивы

 

Ацетатный буфер рН 2,8; 3,2.

0,5 N NaOH .

5 % ТХУ.

2,5 % раствор гемоглобина

Реактив Фолина

Ход анализа

 

Метод определения активности катепсина Д основан на его способности гидролизовать гемоглобин с образованием пептидов , растворимых в присутствии трихлоруксусной кислоты.

Гомогенаты готовят на дистиллированной воде при разной концентраций тканей: гонады и мышцы -30%, печень и икра - 10%. Реакционная смесь состоит из 0,5 мл 0,35 М ацетатного буфера (рН 2,8 для сыворотки, рН 3,2 для других тканей). 0,5 мл гомогената и 1 мл 2,5% гемоглобина. Инкубацию проводили при 37 °С 60 мин. при встряхивании. Реакцию останавливали, добавляя 2 мл 5% ТХУ. К 1 мл супернатанта для нейтрализации добавляют 2 мл 0,5 N NaOH и о,5 мл реактива Фолина . Активность фермента выражали в мкМ тирозина (мг белка/час). Количество белка определяют методом Лоури.

Категория: Биохимия | Добавил: bugayov (12.05.2008)
Просмотров: 1171 | Рейтинг: 0.0/0 |
Форма входа
Поиск
Друзья сайта
GISMETEO: Погода по г. Ростов-на-Дону

Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0