Пятница, 10.07.2020, 22:59
 Физиология и биохимия гидробионтов
Главная Регистрация Вход
Приветствую Вас, Гость · RSS
Меню сайта
Категории каталога
Физиология [9]
Биохимия [9]
Литература [0]
Генетика [1]
Ихтиология [0]
 Каталог статей
Главная » Статьи » Методики » Биохимия

Определение активности ДНК-азы и РНК-азы

Оборудование

 

Термостат (37о С ).

Центрифуга (6000 об/мин).

Спектрофотометр СФ - 46.

Пробирки.

Мерные колбы 50 - 200 мл.

Пипетки 1- 10 мл.

Реактивы

 

Ацетатный буфер рН 5,0.

0,1 % дезоксирибонуклеиновая и рибонуклеиновая кислоты

0,5 Н хлорная кислота.

0,25% раствор уранилнитрата

Ход анализа

 

Определение активности кислых нуклеаз проводят спектрометрическим методом.

Субстратом являются 0,1% растворы соответствующих нуклеиновых кислот на ацетатном буфере рН 5,0 (для дезоксирибонуклеиновой кислоты) и 5,2 для рибонуклеиновой кислоты). В пробирки вносят по 0,8 мл исследуемой ферментной вытяжки, смесь инкубируют 15 мин в термостате при 30о С Реакцию останавливают добавлением 2 мл осадителя . При определении активности ДНК-азы это 0,5 Н раствор хлорной кислоты, а в случае РНК-азы - 0,25% раствор уранилнитрата на 0,5 Н хлорной кислоте. Для лучшего осаждения непрореагировавших нуклеиновых кислот пробы выдерживают в холодильнике в течение 1-1,5 часов. Центрифугировали 15 мин при 4000 об/мин. Отбирают 1 мл надосадочной жидкости, добавляют 5 мл бидистиллированной воды и измеряют оптическую плотность при 260 нм. Активность нуклеаз выражают в условных единицах активности ΔЕ260 в 1 мг белка. Содержание белка в пробах определяют по методу Лоури.

Категория: Биохимия | Добавил: bugayov (12.05.2008)
Просмотров: 1272 | Рейтинг: 0.0/0 |
Форма входа
Поиск
Друзья сайта
GISMETEO: Погода по г. Ростов-на-Дону

Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0