Реактивы |
|
Ацетатный буфер рН 5,0.
0,1 % дезоксирибонуклеиновая и рибонуклеиновая кислоты
0,5 Н хлорная кислота.
0,25% раствор уранилнитрата |
Ход анализа |
|
Определение активности кислых нуклеаз проводят спектрометрическим методом.
Субстратом
являются 0,1% растворы соответствующих нуклеиновых кислот на ацетатном
буфере рН 5,0 (для дезоксирибонуклеиновой кислоты) и 5,2 для
рибонуклеиновой кислоты). В пробирки вносят по 0,8 мл исследуемой
ферментной вытяжки, смесь инкубируют 15 мин в термостате при 30о
С Реакцию останавливают добавлением 2 мл осадителя . При определении
активности ДНК-азы это 0,5 Н раствор хлорной кислоты, а в случае
РНК-азы - 0,25% раствор уранилнитрата на 0,5 Н хлорной кислоте. Для
лучшего осаждения непрореагировавших нуклеиновых кислот пробы
выдерживают в холодильнике в течение 1-1,5 часов. Центрифугировали 15
мин при 4000 об/мин. Отбирают 1 мл надосадочной жидкости, добавляют 5
мл бидистиллированной воды и измеряют оптическую плотность при 260 нм.
Активность нуклеаз выражают в условных единицах активности ΔЕ260 в 1 мг белка. Содержание белка в пробах определяют по методу Лоури. |
