Для
определения жирорастворимых витаминов и каротиноидов из образца ткани
готовят гомогенат на дистиллированной воде в соотношении 1:3 (Tailor et
al., 1976). В пробирку с подготовленной смесью этилового спирта (1 мл)
и 25%-ного водного раствора аскорбиновой кислоты (0,5 мл) вносят 1 мл
полученного гомогената. После предварительного прогрева проб до 70о С в течение 5 минут в смесь приливают 1 мл 10 N раствора КОН и инкубируют в течение 30 минут при 70о
С для омыления липидов, мешающих определению витаминов и каротиноидов.
По окончании инкубации пробы охлаждают под струей холодной воды,
прибавляют 4 мл гексана, энергично встряхивают смесь до однородной
эмульсии в течение 1 минуты, после чего центрифугируют 15 минут при
1000 об/мин. для отделения гексановой фракции, содержащей каротиноиды и
витамины.
Для определения каротиноидов гексановую фракцию спектрофотометрируют при длинах волн 450 и 475 нм на СФ-46.
Содержание восстановленных каротиноидов типа
β-каротина определяют по формуле:
С кар (мг/г сырой ткани) = 16 Е450 /М нав ., мг,
где С кар - содержание каротиноидов в ткани;
Е450 - оптическая плотность раствора при длине волны 450 нм;
М нав - масса навески ткани, использованной в анализе, в мг.
Содержание ксантофиллов определяли по формуле:
С ксан (мкг/г сырой ткани) = 108,5 Е475 /М нав ., г,
Обозначения аналогичны предыдущей формуле.
Определение
токоферола в гексановой фракции осуществляют с помощью
спектрофлуорофотометра RF-510 (Shimadzu, Япония) при длине возбуждения
286 нм и длине испускания 330 нм. Содержание ретинола в этой же фракции
спектрофлуориметрируют при длине возбуждения 325 нм и длине испускания
470 нм.
После построения калибровочной кривой, как для токоферола, так и для ретинола, содержание витаминов рассчитывают по формулам:
токоферол - [(0,0016E2 + 0,2044E) Х 4] мкг/г замороженной ткани;
ретинол - [(E/24,92 - 0,25) Х 4] мкг/г замороженной ткани.
Полученные
данные обрабатывают статистически с использованием стандартных пакетов
программ Microsoft Statistica и Microsoft Excel. | 
