Пятница, 10.07.2020, 22:48
 Физиология и биохимия гидробионтов
Главная Регистрация Вход
Приветствую Вас, Гость · RSS
Меню сайта
Категории каталога
Физиология [9]
Биохимия [9]
Литература [0]
Генетика [1]
Ихтиология [0]
 Каталог статей
Главная » Статьи » Методики » Биохимия

Определение содержания жирорастворимых витаминов (Tailor et al, 1976)

Оборудование

 

Спектрофлуорофотометр RF-510 (Shimadzu, Япония).

Водяная баня.

Пробирки 10 мл.

Пипетки 1 - 10 мл.

Реактивы

 

Дистиллированная вода.

Этиловый спирт 96?.

25%-ный водный раствор аскорбиновой кислоты.

10 N раствора КОН.

Гексан.

Ход определения

 

Для определения жирорастворимых витаминов и каротиноидов из образца ткани готовят гомогенат на дистиллированной воде в соотношении 1:3 (Tailor et al., 1976). В пробирку с подготовленной смесью этилового спирта (1 мл) и 25%-ного водного раствора аскорбиновой кислоты (0,5 мл) вносят 1 мл полученного гомогената. После предварительного прогрева проб до 70о С в течение 5 минут в смесь приливают 1 мл 10 N раствора КОН и инкубируют в течение 30 минут при 70о С для омыления липидов, мешающих определению витаминов и каротиноидов. По окончании инкубации пробы охлаждают под струей холодной воды, прибавляют 4 мл гексана, энергично встряхивают смесь до однородной эмульсии в течение 1 минуты, после чего центрифугируют 15 минут при 1000 об/мин. для отделения гексановой фракции, содержащей каротиноиды и витамины.

Для определения каротиноидов гексановую фракцию спектрофотометрируют при длинах волн 450 и 475 нм на СФ-46.

Содержание восстановленных каротиноидов типа β-каротина определяют по формуле:

С кар (мг/г сырой ткани) = 16 Е450 /М нав ., мг,

где С кар - содержание каротиноидов в ткани;

Е450 - оптическая плотность раствора при длине волны 450 нм;

М нав - масса навески ткани, использованной в анализе, в мг.

Содержание ксантофиллов определяли по формуле:

С ксан (мкг/г сырой ткани) = 108,5 Е475 /М нав ., г,

Обозначения аналогичны предыдущей формуле.

Определение токоферола в гексановой фракции осуществляют с помощью спектрофлуорофотометра RF-510 (Shimadzu, Япония) при длине возбуждения 286 нм и длине испускания 330 нм. Содержание ретинола в этой же фракции спектрофлуориметрируют при длине возбуждения 325 нм и длине испускания 470 нм.

После построения калибровочной кривой, как для токоферола, так и для ретинола, содержание витаминов рассчитывают по формулам:

токоферол - [(0,0016E2 + 0,2044E) Х 4] мкг/г замороженной ткани;

ретинол - [(E/24,92 - 0,25) Х 4] мкг/г замороженной ткани.

Полученные данные обрабатывают статистически с использованием стандартных пакетов программ Microsoft Statistica и Microsoft Excel.

Категория: Биохимия | Добавил: bugayov (12.05.2008)
Просмотров: 1288 | Рейтинг: 0.0/0 |
Форма входа
Поиск
Друзья сайта
GISMETEO: Погода по г. Ростов-на-Дону

Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0